水稻紫黄质脱环氧化酶基因的克隆、体外表达及酶促反应

摘要

从水稻中克隆了紫黄质脱环氧化酶（VDE）基因,其全长cDNA序列为1887bp,编码446个氨基酸,其中转运肽长98个氨基酸.构建了该基因的原核表达载体pET-Rvde,在0.4 mmol/L IPTG的诱导下,外源蛋白大量表达,其分子量与天然的VDE蛋白一致,表达量随诱导时间而增加.Western杂交表明表达蛋白与VDE的多克隆抗体有免疫反应.将表达蛋白用于紫黄质的脱环氧化反应,吸收光谱及HPLC分析结果表明,表达蛋白能在体外催化紫黄质转变成为玉米黄质和环氧玉米黄质.