氨基免疫荧光探针在瓣膜交联度检测中的应用

摘要

目的利用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)能与氨基基团发生特异性不可逆结合,且在波长为488 nm的激发光下发出绿色荧光的特性,检测人工心脏瓣膜的交联程度。方法将去细胞的牛心包浸泡于0.5%的戊二醛溶液中进行交联处理,根据浸泡时间不同分为空白对照组、10 min组、30 min组和6 h组。各组分别制成冰冻切片,经CFSE溶液处理后,通过荧光显微镜观察每组切片的荧光强度,采用图像分析软件计算每组图像的平均荧光强度。同时,从戊二醛处理过的牛心包中提取蛋白质,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测各组牛心包的剩余蛋白含量,与氨基免疫荧光探针法进行比较。结果未交联的氨基数量随交联时间增加逐渐减少,荧光强度空白对照组>10 min组>30 min组>6 h组,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测结果显示,从空白对照组到6 h组可提取的蛋白越来越少。结论与蛋白电泳法检测生物瓣膜交联度相比,CFSE荧光免疫法更为直观灵敏,且能反映瓣膜组织任何部位、层厚的交联效果,为人工生物瓣膜交联度的检测提供新的理论依据和思路。