有限延伸法检测端粒酶活性

摘要

人端粒酶是一种核蛋白体,通过其内含的RNA模板与端粒末端配对把重复端粒片段添加在端粒3'末端;因此,端粒酶活性与细胞凋亡、衰老、永生化有密切关系,是癌症临床预测诊断的一个生物标签.现有的端粒酶活性检测方法,存在灵敏度低和不易定量等问题.本研究采用错配有限延伸法检测端粒酶活性:在人端粒酶延伸人工合成的游离端粒酶底物时,只加入d ATP和d GTP,端粒酶只能把底物延伸4个脱氧核糖核苷酸AGGG.然后加入d NTP,让端粒酶延伸的产物和一条长的引物配对从而延伸出PCR模板;再加入引物进行热启动PCR.PCR后进行非变性PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis),得到希望的唯一1条目标带.同时,用不同的端粒酶浓度梯度进行优化,发现有限延伸法检测端粒酶活性的下限达到250个He La细胞.