运脾泻肺化痰汤通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号轴减轻幼龄哮喘大鼠气道炎症及黏液高分泌

摘要

目的基于白细胞介素(IL)-23/辅助性T细胞17(Th17)炎症轴与磷酯酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)信号轴相关性探讨运脾泻肺化痰汤对幼龄哮喘大鼠气道炎症、黏液高分泌的影响。方法将幼龄SD大鼠56只随机分为7组:正常组、模型组、低剂量运脾泻肺化痰汤组(LTCM)、中剂量运脾泻肺化痰汤组(MTCM)、高剂量运脾泻肺化痰汤组(HTCM)、布地奈德组、联合组,每组各8只。除正常组外,其余各组大鼠腹腔注射卵清白蛋白与氢氧化铝凝胶混合液致敏,1%卵清蛋白雾化激发。正常组、模型组均灌胃0.9%氯化钠2 mL;LTCM、MTCM、HTCM分别灌胃运脾泻肺化痰汤灌胃10、20、40 g/kg;布地奈德组予0.01%布地奈德2 mL雾化吸入20 min;联合组给予MTCM灌胃及布地奈德组雾化,连续4周。分类计数肺泡灌洗液(BALF)中不同种类白细胞;HE、过碘酸-雪夫染色(PAS)观察肺组织病理改变;ELISA检测BALF及血清中IL-17、IL-23水平,免疫组化检测肺组织IL-17、IL-23表达;Western Blot检测肺组织PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白及黏蛋白5AC(MUC5AC)蛋白表达,RTPCR检测肺组织中的IL-17、IL-23、PI3K、AKT、NF-κB p65、MUC5AC mRNA相对表达量。结果与正常组比较,模型组肺组织IL-23、IL-17表达、血清及BALF中IL-17、IL-23水平、BALF白细胞计数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例、IL-17、IL-23、PI3K、AKT、NF-κB p65、MUC5AC mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB p-p65/NF-κB p65、MUC5A蛋白表达升高(P<0.05),BALF嗜碱性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞比例下降(P<0.05)。与模型组比较,干预组肺组织IL-23、IL-17表达、BALF白细胞计数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例、IL-17、IL-23、PI3K、AKT、NF-κBp-65、MUC5AC mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB p-p65/NF-κB p65、MUC5AC蛋白表达降低(P<0.05),嗜碱性粒细胞比例升高(P<0.05);MTCM、HTCM、布地奈德、联合组血清及BALF IL-17、IL-23水平下降(P<0.05);LTCM、MTCM、HTCM、联合组BALF单核细胞比例升高(P<0.05);MTCM及联合组BALF淋巴细胞比例升高(P<0.05)。联合组肺组织IL-23、IL-17表达、BALF嗜酸性粒细胞、中性粒细胞比例、p-PI3K/PI3K、MUC5AC蛋白表达较LTCM、MTCM、HTCM、布地奈德组不同程度降低(P<0.05)。结论运脾泻肺化痰汤可能通过IL-23/Th-17炎症轴抑制PI3K/AKT/NF-κB信号轴转导,通过降低血清及BALF中IL-23、IL-17水平,减少炎细胞迁移、气道炎性浸润及杯状细胞增生从而抑制MUC5AC过表达,减轻气道黏液高分泌及气道炎症。