连翘水提液体外抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对细胞凋亡的保护作用

摘要

连翘是中药配方的重要组分之一,具有良好的抗病毒活性,但其对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的作用尚未得到深入评估.为评估连翘体外MDRV增殖及对鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞凋亡的保护作用,通过四唑盐(MTT)法检测连翘水提液的安全浓度,并从3种给药方式中筛选出连翘水提液的最佳给药方式.在最佳给药方式下,通过半数细胞培养感染剂量(TCID_(50))检测MDRV在DF-1细胞的增殖情况,并采用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因mRNA的表达情况.结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度为0.25-4 mg/mL,最佳给药方式是先感染病毒再加中药,在此给药方式下,连翘水提液能极显著降低MDRV在24-48 h的病毒滴度(P<0.01).与对照组相比,MDRV攻毒组细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著上调(P<0.01),凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著上调(P<0.01)而Bcl-2表达极显著下调(P<0.01);与MDRV攻毒组相比,连翘水提液处理组细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著下调(P<0.01),凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著下调(P<0.01)而Bcl-2表达极显著上调(P<0.01).可见,连翘可以抑制MDRV在DF-1细胞中的增殖,并对MDRV引起DF-1细胞凋亡起到了缓解作用,具有良好抗病毒的活性,结果为进一步筛选出抗MDRV的候选药物提供了基础数据.