消癥抑癌方对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响

摘要

目的 探讨消癥抑癌方对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和迁移的影响及潜在作用机制。方法 利用网络药理学分析消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分和核心靶点,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析筛选其相关生物学过程和通路。制备消癥抑癌方含药血清,用含药血清处理卵巢癌SKOV3细胞。采用CCK-8法和EdU染色法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞迁移的影响;采用Western blotting法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞自噬蛋白(P62)、自噬相关蛋白3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的影响。结果 网络药理学研究显示,消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分是槲皮素、山柰酚、木犀草素、汉黄芩素、柚皮素等,核心靶点是MAPK3、AKT1、SRC、MAPK1、TP53等。KEGG富集分析共得到171条通路(P<0.01),其中Degree值排名较靠前且与卵巢癌相关的通路主要涉及癌症通路、PI3K-AKT通路、MAPK通路、AMPK通路、自噬、mTOR通路等。体外实验结果表明,与对照组相比,10%和20%含药血清组SKOV3细胞存活率和EdU阳性细胞率均降低(P<0.001),细胞迁移率下降(P<0.001),迁移细胞数也减少(P<0.01或P<0.001)。Western blotting结果表明,10%和20%含药血清干预后,P62、ATG3、LC3B-Ⅱ蛋白表达水平均上调(P<0.05或P<0.01或P<0.001),p-AMPK/AMPK的表达水平上调(P<0.001),p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论 消癥抑癌方抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与调控AMPK/AKT/mTOR通路,进而阻断自噬流有关。