趋化因子受体CXCR5慢病毒载体构建及人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞的感染

摘要

目的构建可在人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞中高效表达人CXCR5基因的慢病毒载体,用于CXCR5在自身免疫性疾病发病机制中的研究。方法取健康人外周血分离单个核细胞并提取总RNA逆转录为c DNA,扩增CXCR5的CDS序列,进行克隆,最终构建CXCR5基因的慢病毒穿梭质粒p LVX-IRES-Zs Green1-CXCR5。磷酸钙共转染法包装慢病毒,感染人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞。空白质粒感染Raji细胞作为对照。免疫印迹分析空白质粒和过表达质粒Raji细胞中CXCR5基因表达。结果测序显示CXCR5正确无误的插入到慢病毒穿梭载体p LVX-IRES-Zs Green1多克隆位点中,且包装的慢病毒滴度达3×108TU/ml,免疫印迹证实CXCR5基因在人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞中正确表达。结论成功构建可在人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞中高效表达CXCR5基因的慢病毒穿梭载体,为研究CXCR5在自身免疫性疾病中的机制奠定了基础。