六君子汤合旋覆代赭汤含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞活性及钙离子浓度的影响

摘要

目的探讨六君子汤合旋覆代赭汤治疗胃食管反流病的可能作用机制。方法将2月龄Wistar大鼠分为中药低、中、高剂量组和莫沙必利组、空白组,每组10只。中药低、中、高剂量组分别予以浓度为0. 846、1. 728、3. 456 g/ml六君子汤合旋覆代赭汤溶液灌胃,莫沙必利组予以浓度0. 5 mg/ml莫沙必利溶液灌胃,每次均1. 5 ml/100g,每日2次,空白组予等量生理盐水灌胃,共5天。第5天灌胃后1h腹主动脉取血制备含药血清。出生10~15天的Wistar大鼠3只,禁食18 h后取2 cm左右胃窦组织培养大鼠胃Cajal间质细胞(ICC),并采用免疫荧光法鉴定。ICC细胞稳定培养7天后,分为中药低、中、高剂量组和莫沙必利组、空白组,每组12个样本。调整浓度为5×104/ml接种于96孔板,12 h后加入相应含药血清,200μl/孔,分别培养24、48、72 h,采用MTT法检测ICC细胞活性;激光共聚焦显微镜下进行Fluo-3-AM荧光检测细胞内Ca2+浓度变化。结果稳定培养7天后倒置显微镜下可见ICC呈三角形、梭形或多边形,核大,周围充满胞浆,胞体发出多条大小不等的树枝状突起,突起与周围细胞的胞体和突起相互连接。免疫荧光染色后,在显微镜下观察ICC表面c-kit呈阳性,胞体和突起均明显着色,呈绿色阳性显性。与空白组和中药低剂量组同时间相比,中药中、高剂量组和莫沙必利组在24、48、72 h时ICC活性均显著增强,Ca2+荧光强度升高(P <0. 05);在48 h、72 h时莫沙必利组ICC活性显著高于中药中、高剂量组,Ca2+荧光强度亦高于中药中、高剂量组(P <0. 05)。结论六君子汤合旋覆代赭汤可增强ICC内Ca2+浓度,从而提高ICC活性,这可能是其治疗胃食管反流病机制之一。