补肾调经方对小鼠体外培养卵泡卵母细胞BMPRⅡ/ALK6-Smads表达的影响

摘要

目的观察补肾调经方对小鼠体外培养窦前卵泡成活数及卵母细胞骨形成蛋白Ⅱ型受体(bone morphogenetic protein receptorⅡ,BMPRⅡ)/激活素受体样激酶6-Smads(activin receptor-like kinase6-drosophila mothers against decapentaplegic proteins,ALK6-Smads)信号通路的影响,探讨其提高体外生长卵泡卵母细胞质量的作用机制。方法 65只12日龄健康雌性昆明小鼠,采用机械法分离其窦前卵泡,分别以正常大鼠血清、高、中、低剂量补肾调经方大鼠含药血清、高剂量补肾调经方大鼠含药血清+K02288孵育,分为对照组、补肾高、中、低剂量组(即补肾组)、抑制剂组,普通法体外培养。培养第6天比较补肾组与对照组窦前卵泡成活数,实时荧光定量PCR法检测卵母细胞中BMPRⅡ、ALK6、Smad1、Smad5、Smad8mRNA表达;细胞免疫荧光法检测上述指标和磷酸化的Smad1/5/8(phospho-Smad1/5/8,p-Smad1/5/8)蛋白表达水平。结果与对照组比较,补肾高剂量组窦前卵泡成活数增加,补肾各剂量组BMPRⅡ、ALK6、Smad5、Smad8 mRNA表达水平升高,上述指标及p-Smad1/5/8蛋白表达水平升高,补肾高、中剂量组Smad1 mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05)。与补肾高剂量组比较,抑制剂组p-Smad1/5/8蛋白表达降低(P<0.05)。结论补肾调经方能增加体外培养窦前卵泡成活数,提高卵母细胞质量,其作用机制可能与调控卵母细胞中BMPRⅡ/ALK6-Smads信号通路有关。