SUMO介导截短型人HGF制备及抗肝纤维化作用

摘要

目的研究截短型人肝细胞生长因子突变体(tvNK1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞LX-2纤维化的影响。方法把经PCR和双酶切的小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)和tvNK1的融合基因SUMO-tvNK1插入原核表达载体pET28a,诱导表达和Ni2+亲和层析纯化SUMO-tvNK1;进一步经SUMO蛋白酶Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,MTT法观察其对TGF-β1诱导LX-2纤维化细胞增殖的影响,qPCR及蛋白印迹(WB)检测其对I型胶原蛋白(col1α1)和α–平滑肌球蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。结果宿主菌Rosetta/pET28a-SUMO-tvNK1在37℃经1 mmol/L IPTG诱导5 h获得SUMO-tvNK1的可溶性表达,将超声破碎后上清液经Ni2+亲和层析成功获得SUMO-tvNK1,进一步经Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,SDS-PAGE鉴定其分子量约为22.0 kDa,MTT显示20和40 ng/mL的tvNK1能明显抑制TGF-β1活化的人肝星状细胞LX-2增殖,qPCR及WB显示20和40 ng/mL的tvNK1能显著抑制活化的LX-2细胞中Col1α1和α-SMA在m RNA和蛋白水平表达。结论 SUMO蛋白可用于制备tvNK1,其能抑制TGF-β1活化的LX-2细胞增殖并具有抗纤维化作用,为进一步体内外功能研究打下基础。