猪Ia相关恒定链定位基元突变对其定位功能的影响

摘要

目的研究猪Ia相关恒定链(Ii)胞质区2个亮氨酸基元(Leu7/Ile8和Met16/Leu17)周围氨基酸对基元内膜系统定位功能的影响。方法通过大引物PCR定点突变法,将2个亮氨酸基元及其周围氨基酸分别突变并导入pEGFP-C1真核表达质粒,获得21个突变Ii重组质粒。经LipofectamineTM2000将突变Ii重组质粒分别转染COS-7细胞,荧光显微镜检测突变Ii在细胞内的定位。结果 Leu 7/Ile 8和Met 16/Leu 17独立调控Ii分子的细胞内化。当保留其中一个亮氨酸基元,突变另一个亮氨酸基元周围氨基酸时,GFP-Ii融合蛋白或定位于内膜系统或分布于整个细胞。结论猪Ii链含有2个亮氨酸定位基元,亮氨酸基元的定位功能需要周围特定位置的氨基酸的支持。