基于网络药理学及实验验证探究益肾活血方治疗肾纤维化的作用机制

摘要

目的采用网络药理学、分子对接技术结合动物实验,探讨益肾活血方治疗肾纤维化的作用机制。方法通过TCMSP数据库获取益肾活血方的活性成分和作用靶点;采用GeneCards、OMIM、PharmGkb和TTD数据库获取肾纤维化的疾病靶点,构建“益肾活血方成分-疾病靶点”网络图;采用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI);使用R软件进行GO功能及KEGG通路富集分析;对活性成分与关键靶点进行分子对接验证。动物实验采用腺嘌呤灌胃制备肾纤维化小鼠模型,给予益肾活血方灌胃治疗,连续2周。Masson染色检测小鼠肾脏胶原纤维沉积水平。ELISA法测定肾脏组织Col-I和FN蛋白水平。qRT-PCR法验证分子对接结果。Western blot法检测小鼠肾组织E-cadherin、α-SMA、TP53和STAT3蛋白水平。结果发现关键活性成分为槲皮素、木犀草素、山柰酚、丹参酮ⅡA等。核心靶点网络显示其关键靶点为STAT3、TP53、HSP90AA1等。富集分析发现益肾活血方可能通过调控PI3K-Akt、AGE-RAGE、TNF等信号通路改善肾纤维化。分子对接结果验证了槲皮素、木犀草素和丹参酮ⅡA等与核心靶点均具有较强的结合能力。动物实验表明,益肾活血方能有效改善肾纤维化小鼠肾脏胶原纤维沉积,降低Col-I和FN蛋白表达水平,降低E-cadherin蛋白表达,促进α-SMA表达,还可显著下调TP53、STAT3的表达。结论益肾活血方可能是通过槲皮素、木犀草素和丹参酮ⅡA等关键活性成分作用于STAT3、TP53等靶点改善肾纤维化。