姬松茸多糖对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的保护作用

摘要

目的考察姬松茸多糖(Agaricus blazei polysaccharide,ABPS)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞(H9C2)损伤的影响及潜在机制。方法分别用H_(2)O_(2)(200μmol·L^(-1))、ABPS(0.5、1.0、2.0 g·L^(-1))、LY294002(10μmol·L^(-1))处理心肌细胞H9C2,将H9C2细胞分为NC组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+ABPS 0.5 g·L^(-1)组、H_(2)O_(2)+ABPS 1.0 g·L^(-1)组、H_(2)O_(2)+ABPS 2.0 g·L^(-1)组、H_(2)O_(2)+ABPS+PBS组及H_(2)O_(2)+ABPS+LY294002组,CCK8实验和流式细胞术分别检测细胞存活率和凋亡率;Western blot分别检测细胞相关蛋白P21、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、Cleaved含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)、Cleaved含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cysteinyl aspartate specific proteinase 9,Caspase-9)、p-蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)和AKT的表达水平,试剂盒检测H9C2细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的水平。结果与对照NC组相比,H_(2)O_(2)组心肌细胞H9C2的凋亡率、P21、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、p-AKT蛋白、ROS和MDA含量均升高,Cyclin D1、GSH-Px含量和细胞存活率均降低,差异具有统计学意义(P<0.05);0.5、1.0、2.0 g·L^(-1)ABPS均可逆转H_(2)O_(2)对心肌细胞H9C2的作用,呈剂量依赖趋势,且2.0 g·L^(-1)ABPS效果最好;经LY294002阻断AKT信号后,与H_(2)O_(2)+ABPS+PBS组相比,H_(2)O_(2)+ABPS+LY294002组细胞凋亡率、P21、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、p-AKT蛋白、ROS和MDA含量均升高,Cyclin D1、GSH-Px含量和细胞存活率均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论姬松茸多糖通过AKT信号通路保护心肌细胞H9C2免受H_(2)O_(2)诱导的氧化应激损伤和凋亡。