天青蛋白基因在酮古龙酸菌中的克隆与表达

摘要

目的克隆来源于脱氮副球菌的天青蛋白基因(pden1359),并在酮古龙酸菌(Ketogulonicigenium sp.)Rif-B-003中表达。方法利用酶切酶连的方法构建重组质粒pBBR1 MCS-2-pden1359,并以接合转移的方法将重组质粒导入到菌株Rif-B-003中。采用双酶切、PCR验证获得阳性重组菌Rif-B-003/pBBR1 MCS-2-pden1359,SDS-PAGE检测Pden1359的蛋白表达,分光光度法检测菌体内过氧化氢和超氧阴离子浓度。结果成功构建重组质粒pBBR1 MCS-2-pden1359并导入菌株RifB-003中获得重组菌Rif-B-003/pBBR1 MCS-2-pden1359,重组菌体SDS-PAGE显示在目的蛋白处有表达条带。在发酵各个时期,重组菌株比对照菌株Rif-B-003体内过氧化氢浓度均降低,最多降低1.05×10-8umol·cfu^(-1)(16.21%),超氧阴离子浓度也降低,最多降低8.52×10^(-1)1umol·cfu^(-1)(13.98%)。结论来源于脱氮副球菌的天青蛋白基因pden1359在酮古龙酸菌Rif-B-003中成功表达,可以降低菌体内活性氧水平。