钩吻素子对H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞氧化应激和凋亡的影响

摘要

目的:探讨钩吻素子(koumine)对H_2O_2诱导的猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)损伤的保护作用及其机制。方法:通过MTT法检测koumine对IPEC-J2细胞增殖的影响,并用H_2O_2诱导IPEC-J2细胞建立细胞损伤模型,通过MTT和LDH比色法检测分析koumine保护IPEC-J2细胞免受H_2O_2损伤的效果;生化方法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹(western blot)技术检测凋亡相关蛋白bax和bcl-2的表达情况;用流式细胞仪检测氧自由基(ROS)释放量和细胞凋亡率。结果:检测浓度范围内koumine对IPEC-J2细胞没有毒性;koumine可以通过调控IPEC-J2细胞中SOD活性、LDH漏出率、MDA水平和ROS的产生,保护H_2O_2对IPEC-J2细胞的氧化损伤,抑制H_2O_2引起的IPEC-J2细胞凋亡;koumine在抑制H_2O_2引起的细胞凋亡过程中,减少了促凋亡蛋白Bax表达,增加了抑凋亡蛋白Bcl-2表达,使得Bax/Bcl-2的比值在药物作用时随剂量的增加逐渐降低。结论:koumine能够保护IPEC-J2细胞对抗H_2O_2诱导的氧化损伤,具有一定的时间和剂量依赖关系,其作用机制与抑制细胞凋亡有关。