脂肪间充质干细胞条件培养液和二甲双胍对衰老皮肤成纤维细胞的作用

摘要

目的探讨脂肪间充质干细胞条件培养液、二甲双胍对衰老皮肤成纤维细胞的作用效果,并研究两者的作用机制。方法制备ADSC-CM、含2 mmol/L二甲双胍无血清培养基(Met)、ADSC-CM+2 mmol/L二甲双胍(ADSC-CM+Met),添加到衰老皮肤成纤维细胞中,在培养72 h后,使用倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老率,超氧化物歧化酶试剂盒检测细胞SOD活性以及qPCR检测COL1、ELASTIN、MMP-1、KLOTHO、NF-κB、GSH-PX基因表达量。结果①ADSC-CM组的细胞形态呈长梭形,轮廓清晰,折光性好,其他两组的细胞形态折光性较差;②ADSC-CM、Met、ADSC-CM+Met三组均能提高皮肤成纤维细胞活力,降低SA-β-gal染色率,且ADSC-CM组的作用最好;③三组实验组均能提高COL1基因表达,抑制MMP-1表达,但Met组的ELASTIN基因表达与对照组无差异性,其他两组均显著高于对照组;④KLOTHO基因表达,ADSC-CM和Met组均高于对照组,三组实验组的SOD活性也显著高于对照组,但谷胱甘肽氧化酶GSH-PX基因表达,只有ADSC-CM组显著高于对照组,其他两组显著低于对照组,Met组NF-κB基因表达与对照组差异无显著性,其他两组均显著性降低。结论脂肪间充质干细胞条件培养液、二甲双胍能提高皮肤成纤维细胞活性,延缓其衰老,且两者的作用效果有差异,这可能与作用机制相关,但可以确定的是,两者共同添加会产生拮抗作用。