基于NLRP3炎症小体探讨黄连厚朴汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制

摘要

背景黄连厚朴汤(Huanglian Houpo Decoction,HHD)具有抗炎的药理作用,且能改善溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)所致肠道炎性损伤,但其潜在作用机制尚不清楚.目的以核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体为切入点,探讨HHD对UC的作用机制.方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组、黄连厚朴汤低、中、高剂量组.除正常组外,采用3%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导小鼠UC模型,造模的同时按分组给药.给药期间,每日进行小鼠的一般情况评价,计算疾病活动指数(disease activity index,DAI).给药结束后,取结肠和血清,测量结肠长度,评估结肠黏膜损伤指数(colon mucosa damage index,CMDI),以苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结肠组织病理改变并进行病理学评分,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中促炎因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测结肠组织NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(cystein-asparate protease 1,Caspase-1)的蛋白表达水平.结果与正常组相比,模型组小鼠DAI评分显著升高(P<0.01),结肠长度明显缩短(P<0.01),CMDI评分显著升高(P<0.01),组织病理学评分显著降低(P<0.01),血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平显著增高(P<0.01),结肠组织中NLRP3与Caspase-1蛋白表达显著增多(P<0.01).与模型组相比,黄连厚朴汤各剂量组和美沙拉嗪组DAI评分显著改善(P<0.01),结肠长度明显恢复(P<0.05或P<0.01);黄连厚朴汤中、高剂量组及美沙拉嗪组CMDI评分明显下降(P<0.05或P<0.01),组织病理学评分明显降低(P<0.05或P<0.01);黄连厚朴汤各剂量组和美沙拉嗪组血清中促炎因子IL-1β、IL-6及TNF-α水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);黄连厚朴汤中、高剂量与美沙拉嗪组结肠组织中NLRP3与Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.01).结论黄连厚朴汤可通过抑制NLRP3炎症小体活化缓解DSS所致小鼠溃疡性结肠炎.