利用新的外植体建立棉花高效转化系统的研究

摘要

利用陆地棉(Gossypium hirsutum cv.Cok-er312和G.hirsutum.晋棉7号,冀合321)8～12d无菌苗侧根10mm切段作为新的外植体与农杆菌LBA4404pBK9(35s::LUC::Nos)共培养将外源基因导入棉花,成功的获得转基因工程植株,提高了愈伤组织和转基因工程植株的转化效率.pBK9质粒上携带的萤光素酶基因[Lucif-erous(1ux)]为报告基因(reporter gene),新霉素磷酸转移酶基因(npt Ⅱ)为选择标记基因(markergene),经选择获得的转基因工程植株通过VedioImage System进行整株活体萤光素酶基因(1ux)活性表达检测,获得T.代和T1代萤光素酶基因(1ux)阳性表达植株.进行DNA分子杂交(Southern blot)分析,证明外源基因已经整合到棉花基因组中.转基因工程植株萤光素酶基因(1UX)和新霉素磷酸转移酶基因(npt Ⅱ)在自交后代中得到保持,外源基因呈核基因单一位点显性遗传.