三氯醋酸/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白效果的对比研究

摘要

目的 探讨三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果.方法 选取2017年6月至2019年6月长春市中心血站采集的O型RHD阳性新鲜冰冻血浆12例,组成4个样品并分别编号为A1、A2、B1、B2.采用TCA/丙酮沉淀法去除A1、A2样品血浆中高丰度蛋白,硫酸铵沉淀法去除B1、B2样品血浆中高丰度蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证血浆中高丰度蛋白去除的效果.Clean-up Kit去除蛋白质中干扰物质,并采用SDS-PAGE和双向电泳(2-DE)验证Clean-up Kit的效果.结果 银染的SDS-PAGE胶图显示,TCA/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法均可有效去除血浆高丰度蛋白,但与硫酸铵沉淀法相比,TCA/丙酮沉淀法的SDS-PAGE条带更清晰.SDS-PAGE和2-DE显示两种方法去除清蛋白的血浆Clean-up Kit后对去除血浆中其他干扰物质效果并不明显.结论 TCA/丙酮沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果更好,且去除血浆中清蛋白后的血浆Clean-up Kit对去除效果无显著影响,可直接进行2-DE、图像分析及质谱检测分析.