miR-186通过靶向调控Smad6抑制人胶质瘤细胞增殖

摘要

cqvip:目的探讨miR-186靶向Smad6对人胶质瘤细胞增殖的影响。方法运用生物信息学软件预测miR-186的下游靶基因。双荧光素酶报告实验验证miR-186与Smad6的3′-非编码区(3′-UTR)的结合作用。人胶质瘤细胞系U87转染miR-186 mimics或miR-186 inhibitor后,qRT-PCR检测miR-186及Smad6 mRNA的表达;Western blot检测Smad6蛋白的表达水平。Smad6过表达质粒或对照质粒与miR-186 mimics或mimics NC共转染,Western blot检测Smad6蛋白的表达水平;CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖。结果生物信息学软件预测出Smad6为miR-186的下游靶基因之一。双荧光素酶报告实验发现,相比各自对照组,转染miR-186 mimics或miR-inhibitor后,野生型Smad6 3′-UTR荧光强度相应地明显减弱或增强,而突变了的Smad6 3′-UTR荧光强度没有明显变化。相较于各自的对照组,人胶质瘤细胞系U87转染miR-186 mimics后,Western blot检测发现Smad6蛋白表达下调,而转染miR-186 inhibitor后,Smad6蛋白的表达升高。miR-186 mimics与Smad6过表达质粒共转染后,CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖情况,发现Smad6过表达可以逆转miR-186 mimics引起的细胞增殖的抑制作用。结论miR-186可通过靶向调控Smad6的表达进而发挥其抑制人胶质瘤细胞增殖的作用。