丙型肝炎病毒NS5B区基因的扩增、克隆及序列分析

摘要

目的对丙型肝炎病毒(HCV)NS5B区基因克隆并测序,研究其变异状况.方法从HCV RNA阳性血清中抽提病毒RNA,利用巢式RT-PCR对NS5B区基因进行扩增,将扩增获得的靶cDNA克隆至PKPL-3a质粒载体中,并以内引物为测序引物进行序列测定分析.结果构建了已克隆HCV NS5B区基因的重组质粒KHC5-1;序列分析表明,与HCV-BDS株同源性最高,属于主要流行于我国的HCV 1b基因亚型.结论证实了在NS5B区,与RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性密切相关的基元结构Gly-Asp-Asp及其相邻序列的同源性非常高.