白藜芦醇调控miR-212-3p逆转肝癌细胞对顺铂的耐药性研究

摘要

目的 探究白藜芦醇（RES）调控miR-212-3p逆转人肝癌顺铂（DDP）耐药细胞株（Huh-7/DDP）对DDP耐药的可能分子机制。方法 将0、2.5、5、10、20、40μmol/L的RES处理Huh-7/DDP细胞，采用CCK-8法检测Huh-7/DDP细胞的增殖能力；RES处理Huh-7/DDP细胞后，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-212-3p的表达水平；将Huh-7/DDP细胞分为未处理组，DDP组，RES+DDP组，NC mimic+DDP组，miR-212-3p mimic+DDP组，NC inhibitor+DDP组，NC inhibitor+RES+DDP组，miR-212-3p inhibitor+DDP组，miR-212-3p inhibitor+RES+DDP组，采用CCK-8法检测Huh-7/DDP细胞的DDP半数抑制浓度(IC50)值；采用流式细胞术检测Huh-7/DDP细胞凋亡比例。采用Western blot法检测p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果 单用RES终浓度5μmol/L对Huh-7/DDP细胞生长无明显抑制作用（P＞0.05）,为最大无毒剂量。RES+DDP组的DDP IC50明显低于DDP组（P＜0.05）。DDP组和RES+DDP组Huh-7/DDP细胞凋亡比例高于未处理组（P＜0.05）,且RES+DDP组明显高于DDP组（P＜0.05）。RES处理的Huh-7/DDP细胞中miR-212-3p的表达水平明显高于未处理组（P＜0.05）。miR-212-3p mimic+DDP组中的DDP IC50值低于NC mimic+DDP组，miR-212-3p mimic+DDP组中的细胞凋亡比例高于NC mimic+DDP组（P＜0.05）。miR-212-3p inhibitor+DDP组的DDP IC50明显高于NC inhibitor+DDP组，NC inhibitor+RES+DDP组DDP IC50明显低于NC inhibitor+DDP组，而miR-212-3p inhibitor+RES+DDP组中的DDP IC50值高于NC inhibitor+RES+DDP组。miR-212-3p inhibitor+DDP组的细胞凋亡率明显低于NC inhibitor+DDP组，NC inhibitor+RES+DDP组的细胞凋亡率高于NC inhibitor+DDP组，而miR-212-3p inhibitor+RES+DDP组的细胞凋亡率低于NC inhibitor+RES+DDP组（P＜0.05）。DDP组、RES+DDP组中的p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白水平低于未处理组（P＜0.05）,Bax蛋白水平高于未处理组（P＜0.05）,其中RES+DDP组中的p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白水平低于DDP组（P＜0.05）;RES+DDP组中的Bax蛋白水平高于DDP组（P＜0.05）。结论 RES可能通过提高Huh-7/DDP细胞中miR-212-3p的表达水平，抑制PI3K/Akt通路蛋白的磷酸化，发挥逆转肝癌DDP耐药的作用。