基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响

摘要

目的 基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响.方法 以改良Hulth法制备兔KOA模型.将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周.HE染色、MASSON染色法及电镜分别观察家兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法测兔血清IL-1β、TNF-α水平;Western blot及RT-PCR检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ蛋白及mRNA表达;免疫组化法检测NF-κB p65入核表达.结果 与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL-1β、TNF-α水平上升(P＜0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05,P＜0.01),CollagenⅡ蛋白及mRNA表达下调(P＜0.01),NF-κB p65入核表达升高(P＜0.05).与模型组比较,散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨细胞结构仅轻度损伤,血清IL-1β、TNF-α水平降低(P＜0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05,P＜0.01),NF-κB p65入核表达降低(P＜0.05,P＜0.01);散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织中CollagenⅡ蛋白及mRNA表达均上调(P＜0.05,P＜0.01).结论 散寒化痰方可能通过抑制膝关节软骨细胞NF-κB p65入核表达,阻止NF-κB信号通路激活,下调MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5及上调CollagenⅡ表达,抑制兔血清IL-1β、TNF-α水平升高,进而保护膝骨关节软组织,延缓KOA发生与发展.