羊栖菜褐藻糖胶CSFP-1抗肿瘤活性及机制研究

摘要

目的分离纯化制备羊栖菜褐藻糖胶(CSFP-1),并对其抗肿瘤活性及可能作用机制进行初步研究。方法通过冷水浸提法制备羊栖菜褐藻糖胶(CSFP),经超滤系统分离获得CSFP-1,并采用苯酚-硫酸比色法、PMP衍生化、高效液相色谱法、红外光谱分析等多种方法对其理化性质进行分析;采用MTT法评价CSFP-1(0、10、100、300μg/m L)对宫颈癌细胞(He La)、肺癌细胞(A549)和肝癌细胞(Hep3B)生存能力的影响;应用流式细胞术评价CSFP-1对He La细胞细胞周期的影响;应用Western blotting技术评价CSFP-1对He La细胞凋亡和自噬相关蛋白表达的影响。结果 CSFP-1的糖含量为84.18%,糖醛酸含量为14.28%,硫酸根含量为10.02%,平均相对分子质量为5.6×104,主要由半乳糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和木糖组成。CSFP-1具有选择性细胞毒性,对He La细胞生长发挥显著抑制作用(P<0.05、0.001),对A549和Hep3B细胞存活率没有明显影响。与对照组比较,He La细胞经CSFP-1处理24 h后,G1期细胞比例明显增加(P<0.001);经CSFP-1处理48 h后,S期细胞比例显著增加(P<0.05、0.01、0.001),G2期细胞比例显著减少(P<0.01、0.001),均呈现剂量相关性。与对照组比较,CSFP-1 100、300μg/m L剂量组处理24 h,300μg/m L剂量组处理48 h Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.05);100、300μg/m L剂量组处理24、48 h Beclin-1蛋白表达显著增加(P<0.05、0.01),且存在时间和剂量相关性。结论 CSFP-1具有选择性抑制He La细胞增殖作用,作用机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡相关。