hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC靶向抗肝癌及旁观者效应机制的研究

摘要

目的 观察人端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷(hTERT-TK/GCV)联合hTERT-胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)对肝癌细胞株HepG2生长及凋亡的靶向杀伤效应.方法 细胞培养,构建pGL3-hTERT-CD质粒,hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC同时转染HepG2细胞和正常肝细胞L-02,用噻唑蓝(MTT)法观察药物浓度对肝癌细胞存活率的影响,用DNA缺口末端标记法(TUNEL)观察自杀基因对肝癌细胞生长和凋亡的影响,以及对旁观者效应的观察.结果 MTT法显示hTERT启动子驱动下两自杀基因体系可以协同表达于肝癌细胞,当GCV为20 μg/ml,5-FC为200 μg/ml时,对HepG2细胞的杀伤作用达到最大.TUNEL法显示在肝癌细胞中,自杀基因一被启动子高效表达,产生凋亡小体和明显的细胞凋亡率,转染正常肝细胞无此现象.结论 hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC基因体系能够靶向杀伤肝癌细胞,存在明显的旁观者效应,弥补了基因治疗转染效率不高的问题,便于指导今后的实验和研究.