抗抑郁剂作用机制的研究及其在新药研发中的应用

摘要

目的：探讨结构迥异的各类抗抑郁剂可能的共同作用方式与机理，为新药研发提供新策略。方法：MTT比色法及乳酸脱氢酶法检测细胞活性；以FLira-2／AM荧光标记法检测胞内Ca^2+浓度；比色法检测一氧化氮合酶(NOS)活性；流式细胞仪法检测细胞分裂周期；免疫组化法检测小鼠海马神经元再生及脑源性神经营养因子(BDNF)水平；利用基因芯片技术检测药物相关基因。结果：三类经典抗抑郁剂[包括三环类的去甲丙咪嗪(DIM)、5-HT重摄取抑制剂氟西汀(FLU)、单胺氧化酶抑制剂马氯贝胺(MOC)]对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)300μM处理24h所致．PC12细胞损伤有显著抑制作用，并且减弱NMDA诱导的PC12细胞内Ca^2+超载及NOS活性。继药物对抗细胞损伤作用的研究之后，接下来探讨了药物是否可促进细胞分裂与神经元再生。研究表明，NMDA600μM处理3天可显著降低：PC12细胞S期百分率，而DIM1，5μM，FLU1，5μM或MOC2，10μM可显著逆转这一现象，使S期细胞百分率显著提高。进一步研究发现，慢性应激24天小鼠海马齿状回神经元再生低下甚至消失，而DIM 10mg／kg，FLU10mg／k或MOC 40mg／kg(ip)显著提高海马神经元再生。同时，抗抑郁剂显著提高海马脑源性神经营养因子(BDNF)的水平。本研究室在研新药巴戟天六聚寡糖、槲皮素三糖甙、胍丁胺表现出与上述经典药物一致的作用。利用小鼠2048点表达谱芯片发现，DIM5μM可以诱导皮质酮处理的PC12细胞内259个基因表达改变，其中163个基因表达降低(如葡萄糖激酶等)；96个表达升高(如生长分化因子-9)。以细胞原位杂交验证，结果与基因芯片俭测一致。结论：各类结构不同的经典抗抑郁剂均可对抗NMDA诱导的细胞损伤并海马神经元再生，这可能与其抑制NMDA受体-Ca^2+-NOS通路功能密切相关，其结果导致与神经元营养与再生、生长与分化密切相关基因的表达改变(如BDNF、生长分化因子等)。本研究室在研新药巴戟天六聚寡糖、槲皮素三糖甙、胍丁胺均有显著细胞保护和促神经元再生作用，其抗抑郁活性也在多模型中得到证实。