NHERF-1介导雌激素调节PTEN蛋白表达的研究

摘要

目的：研究雌激素调节PTEN蛋白表达的分子机制。方法：利用蛋白质芯片筛选PTEN的结合蛋白，发现了NHERF-1与PTEN的相互作用；应用GST pull-down、over-lay和免疫共沉淀等方法确认了其二者的相互作用。通过瞬时转染、免疫印迹分析、RT-PCR、RNAi以及蛋白降解速度检测等方法检测NHERF-1对细胞内PTEN稳定性的影响。结果：发现了PTEN与NHERF-1的相互作用，该相互作用是通过PTEN羧基末端与NHERF-1的第一个PDZ结构域相结合而实现的。将PTEN羧基末端的4个氨基酸分别突变为丙氨酸，都会明显抑制二者的结合。利用免疫共沉淀确认了细胞内完整的PTEN与NHERF-1蛋白分子的相互作用。发现NHERF-1的表达可以提高细胞内PTEN的蛋白表达量，而其mRNA表达水平没有增加。利用环己酮抑制新蛋白合成后，检测到NHERF-1的表达可以抑制PTEN蛋白的降解速度；RNAi抑制内源性NHERF-1的表达导致IYFEN的蛋白表达量显著下降。雌激素可以明显增高NHERF-1与PTEN的蛋白表达，RNAi干扰NHERF-1表达后，雌激素不再调节PTEN的蛋白的表达。结论：PTEN与NHERF-1可以特异结合。NHERF-1与PTEN结合显著提高PTEN蛋白的稳定性；雌激素并不直接调节PTEN蛋白的表达而是通过诱导NHERF-1的表达，引起PTEN蛋白稳定性的增强而导致PTEN蛋白含量的提高。