双环醇对酒精中毒小鼠肝脏细胞凋亡的保护作用及机制研究

摘要

目的：研究双环醇对酒精中毒小鼠肝脏细胞凋亡的保护作用，并从酒精代谢、氧化应激、硝化应激、线粒体损伤、内源性与外源凋亡信号传导通路探讨相关作用的分子机制。方法：ICR小鼠灌胃给予双环醇200，300mg／kg，连续三次。末次给药1h后给予酒精6g／kg，每12h一次，共三次，末次给予酒精10h后处死动物。采用生化法测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）活性：肝脏线粒体和胞浆乙醇脱氢酶（ADH）、乙醛脱氢酶活性（ALDH）、微粒体CYP2E1活性；肝脏胞浆NAD＋／NADH、线粒体谷胱甘肽（GSH）含量、膜电位、肿胀度、呼吸链复合酶Ⅰ和Ⅳ（MRCⅠ、MRCⅣ）活性；肝脏诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性、一氧化氮（NO）含量。应用WesternBlot法检测肝脏环氧合酶．2（COX．2）、iNOS、CYP2E1、Bax、Bcl—XS/L、Fas、Fas-L、细胞色素C表达，TUNEL法检测细胞凋亡，HE染色检测病理形态学变化。结果：双环醇200，300mg／kg对酒精中毒小鼠肝脏损伤和细胞凋亡具有明显保护作用，表现为降低升高的ALT、AST水平，减轻肝细胞髓样变性和小空泡变性等病理学改变，抑制COX-2过表达，减少TUNEL阳性细胞数目。双环醇还可抑制乙醇诱导的ADH、ALDH和CYP2E1活性升高，提高线粒体GSH含量，降低胞浆NAD’／NADH比例，降低肝脏NO含量，抑制iNOS活性和表达，恢复线粒体膜电位，减轻线粒体肿胀度，维持MRC活性，抑制Bax、Fas、Fas-L表达，提高Bcl-XS/L表达，减少线粒体细胞色素C释放。结论：双环醇对酒精中毒小鼠肝脏损伤和细胞凋亡具有明显的保护作用，其作用机制与调节酒精代谢，抑制氧化和硝化应激，减轻线粒体损伤，抑制凋亡相关蛋白表达、增加抗凋亡蛋白表达，从而调控内源性与外源性细胞凋亡信号传导通路相关。