非洲爪蟾卵非细胞翻译体系的建立及应用

摘要

目的当前人类基因组研究的重心正在由"结构"向"功能"转移.而基因功能的研究离不开基因的表达,这就迫切需要一种操作简便,适用范围广的表达工具来表达有功能的蛋白质.方法非洲爪蟾注射HCG催卵,2%半胱氨酸去胶膜,高速离心制备卵提取物,即为非洲爪蟾卵非细胞翻译体系.通过亚克隆技术将TFAR19基因克隆到体外转录质粒中,通过酶切线性化模板,体外转录,加帽合成cRNA,将其加入到制备的蛙卵提取物中进行体外翻译.结果用Western blot鉴定,获得了高效翻译,并且加入亚精胺和ATP再生系统可以提高翻译的效率.结论非洲爪蟾卵非细胞翻译体系为表达有功能的蛋白提供了一种极有应用前景的表达工具.