针对趋化因子受体CCR5的SPA-WGA药物筛选方法

摘要

目的 建立针对趋化因子受体CCR5的药物筛选SPAWGA法[35S]GTPγS结合实验方法.方法 通过降低SPAWGA小球用量和对其他各种因素进行优化,如细胞膜用量、GDP浓度、体系孵育时间和样品连续测量时间,建立了SPAWGA法[35S]GTPyS结合实验方法.结果 最后优化得到实验条件为:100μl反应体系,0.1 mg SPA-WGA小球,10μgCHO-CCR5细胞膜,10μmol·L-1 GDP和0.3 nmol·L-1[35S]GTPγS,室温孵育1.5 h并且在1 200 min之内完成所有样品测量.该法与传统抽滤法比较,测量得到RANTES的EC50分别为:1.40 nmo1·L-1和2.90 nmol·L-1,测量得到SCH-C的IC50分别为:2.95 nmol·L-1和2.73 nmol·L-1,测量结果相似,均呈现出较好的剂量效应关系.利用该法筛选54个化合物,筛到3个IC50在1～10 nmol·L-1的化合物.这3个化合物是否具有HIV-1进入抑制剂的潜在开发价值,还有待体外抗HIV-1实验的进一步验证和筛选.结论 此方法操作简便,灵敏性和重现性好,且可高通量和自动化,该法适用于能与Gi家族蛋白偶联的GPCR的高通量药物筛选.