中药材川贝母标准品特异DNA指纹片段的克隆及鉴定

摘要

目的建立一种能够有效保存川贝母标准品DNA指纹片段的方法。方法采用自主研制的川贝母DNA检测试剂盒提取基因组DNA,体外进行川贝母特异DNA片段克隆,与载体结合并导入生物宿主细胞,通过宿主细胞自我复制产生大量川贝母特异DNA克隆,继而采用质粒提取试剂盒将质粒提取出来,应用PCR及酶切方法检查并鉴定插入片段是否正确。将携带正品川贝母特异DNA序列的菌落置-80℃冰柜保存,分别以1个月、2个月、3个月和6个月为时间点进行复苏,进行稳定性考察。结果转入细胞内的川贝母DNA克隆经PCR扩增后,所得到的琼脂糖凝胶电泳图谱条带清晰,并且进行多次实验结果均一致。4个时间点复苏后的菌落进行PCR扩增后,其琼脂糖凝胶电泳检测图谱中,条带明亮且清晰。结论采用分子克隆技术保存川贝母特异基因片段的方法是可行且有效的,并且稳定性良好,可作为建立中药DNA指纹鉴定数据库的有效依据,方法简单明了,且结果可靠。