离子交换膜层析纯化重组HBsAg 的研究

摘要

目的 评价离子交换膜层析方法纯化CHO 细胞表达的重组HBsAg 的效果以及该方法替代传统超速离心方法和离子交换柱层析方法的潜力.方法 取3 种不同纯化阶段的CHO 细胞C28 株表达的重组HBsAg 样品进行试验,样品1 为重组HBsAg 经疏水层析柱纯化而成,样品2 为样品1 再经超速离心而成,样品3 为样品2 再经凝胶过滤层析而成.分别采用小试级别离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 和中试级别离子交换膜层析系统Sartobind MultiSep ion exchange modules 对HBsAg 样品1 进行纯化,以HBsAg、总蛋白回收率及CHO 细胞残留蛋白含量评价纯化效果,并观察不同膜层析洗脱流速(60、120、180、240 cm/h)对离子交换膜层析系统HBsAg 载量和纯化效果的影响.采用离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 对3种不同纯化阶段的HBsAg 样品进行层析并比较纯化效果.每个批次样品的试验均重复3 次.结果 HBsAg 样品1 经两种SartobindQ 离子交换膜层析系统进行纯化的效果无明显区别,均可有效去除杂蛋白,CHO 细胞残留蛋白含量均低于0.05%,且HBsAg 的回收率均大于80%.在洗脱流速60 ～ 240 cm/h 范围内离子交换膜HBsAg 载量保持恒定,未见流速对纯化结果产生明显影响.3 种不同纯化阶段的HBsAg 样品经离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 纯化后均能达到满意的纯化效果,HBsAg 回收率分别为89.7%、92.3% 和94.1%,CHO 细胞残留蛋白含量分别为0.03%、0.02% 和0.01%.结论 离子交换膜层析方法对CHO 细胞表达的重组HBsAg 纯化效果良好,有望替代传统的超速离心方法和离子交换柱层析方法.