新型冠状病毒在Vero-E6细胞中的增殖特征分析

摘要

目的 了解新型冠状病毒(2019-nCoV)在Vero-E6 细胞中的增殖特征,为病毒的分离培养、抗病毒药物研究以及疫苗研制等工作提供基础.方法 将2019-nCoV做半对数系列稀释,测定病毒的半数组织培养感染剂量(TCID50);以1.74×10-4TCID50/cell的病毒量感染Vero-E6细胞,在病毒吸附后第0～6 d分别收集病毒培养上清,测定上清中病毒感染滴度和病毒核酸拷贝数;测定病毒储存液冻融/非冻融、不同细胞悬液浓度、病毒吸附后洗涤/不洗涤等不同实验条件下的TCID50.结果 2019-nCoV 感染Vero-E6 细胞后,48 h 内培养上清中的病毒TCID50和病毒核酸拷贝数到达或接近峰值,平均复制周期约为3.29 h;48 h 后上清中病毒核酸拷贝数维持在较高水平但病毒感染滴度逐渐下降.病毒储存液的冻融、细胞浓度以及病毒吸附后洗涤等培养条件可轻微影响病毒TCID50.结论 2019-nCoV 感染Vero-E6 细胞在早期增殖迅速,感染后期病毒感染滴度逐渐下降,但病毒核酸拷贝数在上清中维持在较高水平.