淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定

摘要

目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系.方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区.T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE1-3,构建重组昆虫细胞表达载体pIE1-3/try.经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1-neo质粒共转染蚊虫细胞C6/36,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞.用RT-PCR、Western blotting鉴定胰蛋白酶基因的转录表达.结果酶切和PCR鉴定表明,成功构建昆虫细胞表达载体pIE1-3/try;证实胰蛋白酶基因已转入C6/36细胞,并建立稳定转染细胞系,成功地表达目的基因.结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究胰蛋白酶与抗药性的关系提供了良好的实验基础.