刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的克隆与表达

摘要

目的克隆编码刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,构建原核表达载体pET-MMIC3,并在大肠杆菌BL21株中表达.方法采用PCR技术从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,并克隆到T载体上,经测序鉴定后,将目的基因亚克隆到表达载体pET30a(+)上,构建质粒pET-MMIC3.表达产物用Western blot进行进一步确认.结果经初步菌液PCR鉴定,提取质粒双酶切鉴定并测序,确认插入T载体的序列为所需的目的序列;亚克隆构建pET-MMIC3,转化到宿主菌大肠杆菌BL21,得到分子量为37.2kDa的重组表达蛋白,Western blot的结果与预测相符.结论成功的克隆并融合表达了刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽,为进一步研究其在弓形虫粘附和入侵中的作用奠定了基础.