幽门螺杆菌cagA基因稳定转染胃上皮细胞及其对细胞的作用

摘要

目的研究幽门螺杆菌(Hp)cagA基因重组子转染胃上皮细胞后对胃上皮细胞的作用.方法用PCR方法从Hp标准株NCTC11637中获取cagA全长基因,将其3.4kb的开放读码框架定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1;获得的重组子转染SGC-7901细胞,筛选耐潮霉素的细胞克隆,用RT-PCR方法检测细胞内cagA基因在转录水平的表达;用荧光染色技术、MTT、流式细胞术检测CagA对细胞表型、增殖、凋亡及细胞周期的影响.结果 CagA阳性表达的细胞(ScagA)体积变大、胞浆出现空泡样变、胞膜出芽、细胞皱缩;用MTT法检测细胞增殖:ScagA细胞较SpcDNA3.1细胞(pcDNA3.1转染的细胞)生长增殖明显缓慢(P=0.009),表明ScagA细胞生长受抑制;流式细胞检测细胞凋亡结果:ScagA的凋亡率显著高于SpcDNA3.1(P值:0.02);细胞周期分析显示:ScagA细胞有S期比率增高、G2-M、G0-G1期比率下降的趋势.结论 cagA开放读码框架在培养细胞内的表达可引起细胞表型转变、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡.