结核分枝杆菌Hsp16.3的表达、纯化和鉴定

摘要

目的 克隆结核分枝杆菌hspx(acr、Rv2031c)基因,扩增后测序,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白Hsp16.3(Heat Shock Protein 16.3 ).方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出hspx基因片段,连接进入pTA2载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pProEX HTb并在大肠杆菌DH5α中表达,表达蛋白SDS-PAGE分析后,分别与6×His mAb、16kDa mAb和结核病人血清进行Western-blot,最后用Ni-NTA进行亲和层析纯化蛋白.结果 获得结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白基因,经序列测定与GenBank公布的序列完全一致;表达蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量与文献报道一致;Western-blot结果显示,在相对分子量约16kDa处有与6×His mAb和鼠抗16kDa mAb的特异性结合带,而与结核病人血清杂交没有出现结合带.表达产物为包涵体,通过Ni-NTA纯化系统,可得到纯化的目的蛋白.结论 成功地表达、纯化和鉴定了Hsp16.3蛋白,它有可能作为新型结核疫苗的靶抗原.