牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库的构建及EST测序

摘要

目的 构建牛带绦虫(Taenia saginata)成虫全长cDNA质粒文库,为寻找更多有效的牛带绦虫病疫苗候选抗原分子及对三种主要人体带绦虫的功能基因对比研究奠定基础.方法 提取牛带绦虫成虫mRNA;进行反转录合成双链cDNA.PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行Sfi I酶切;用CHROMA SPIN-400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,并与改造载体pBluescript II SK连接,将连接产物涂板,测定文库的滴度;用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建文库质量.随机挑选质粒文库转化的阳性重组克隆,进行较大规模的5'端测序,归并UniGene.结果 测定文库的滴度为1 016个菌落/μL,共测1 023个克隆,对这些序列进行UniGene归并,得到419条unigene.结论 已成功获得高质量的牛带绦虫成虫全长cDNA表达文库.