基于双探针杂交的鸡心包积液综合征病原检测方法的建立与评估

摘要

为了建立一种基于双探针杂交的PCR检测方法,用于鸡心包积液综合征病原的鉴别检测.根据GenBank收录的FAdV-4六邻体hexon基因序列特征,选取2段长度为20 bp、序列相邻的保守区作为双探针,标记于报告基因大豆Lectin基因片段两端,用于PCR检测,建立了FAdV-4环介导PCR检测方法,扩增片段大小362 bp.灵敏性和特异性试验结果表明,该方法可以检出FAdV-4的最低极限浓度为7.85 pg/μL的核酸样品,与FAdV-11、NDV、IBDV、CIAV、IBV和MDV等其他常见禽病原体无明显交叉反应.利用所建立的方法对103份临床样品进行检测,结果显示,环介导PCR对FAdV-4检出率35.0％,高于常规PCR(32.0％)而接近于SYBR Green实时PCR(35.9％);Kappa值检验结果显示,环介导PCR和SYBRGreen实时PCR对FAdV-4检测结果之间高度符合,Kappa值为K=0.98.本试验成功建立了FAdV-4环介导PCR检测方法,可用于FAdV-4的临床检测和流行病学调查.