乳酸乳球菌Lactococcus lactis 1.2472 usp 45基因的克隆与原核表达

摘要

从乳酸乳球菌Lactococcus lactis 1.2472基因组中PCR扩增usp 45基因,与pMD-18T载体连接获pT-usp 45质粒;酶切鉴定并测序正确后,将usp 45基因克隆入原核表达载体pET-28a,获重组质粒pET-28a-usp 45,转入E.coli BL21 (DE3);经IPTG诱导表达及镍亲和层析纯化,由SDS-PAGE和Westren blot进行鉴定.结果表明,本试验获得1 371 bp长度的usp 45基因,构建pET-28a-usp 45质粒,诱导表达并纯化分子量约50kDa的目的蛋白,为进一步研究usp 45蛋白奠定基础.