氯离子敏感的YFP-H148Q/V163S在FRT细胞中的表达及其应用研究

摘要

运用点突变试剂盒构建pcDNA3.1-YFP-H148Q/V163真核表达载体,脂质体介导YFP-H148Q/V163S转染稳定表达Ano1的FRT细胞,荧光淬灭动力学试验检测YFP-H148Q/V163S对其氯离子的敏感性.测序结果显示,YFP (yellow fluorescent protein)特异编码序列上第508-510位碱基CAC突变为CAG,148位组氨酸H突变为谷氨酰胺Q;第553-555位碱基GTG突变为AGC,163位缬氨酸V突变为丝氨酸S.荧光淬灭动力学试验结果显示,向表达YFP-H148Q/V163S的FRT细胞加入Ano1激活剂ionomycin和Cl-,其相对荧光强度明显下降.peDNA3.1-YFP-H 148Q/V163真核表达载体成功构建,并证实表达于FRT胞浆中的YFP-H 148Q/V 163S具有对氯离子敏感的特性.