鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

为制备鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体,以常规分子生物学技术从禽细胞系MDCC-MSB1克隆chIL-10基因,将去信号肽chIL-10基因亚克隆至原核表达载体pET-30a,并在大肠杆菌中表达,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠.经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合.将原核表达的GST-chIL-10融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆.阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌chIL-10抗体的杂交瘤细胞克隆,分别命名为4B2、4F3以及1E3.经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价为1:3.2×106,亲和力解离常数(Kd)分别为1.05×10-9、5.01×10-10以及7.59×10-10.抗体重链类型分别为IgG2a、IgG2a以及IgG1.经Western Blot试验证明,3株单抗均能特异地识别原核或真核表达的chIL-10蛋白,4B2、4F3单抗识别的抗原表位区域为chIL-10 N端的1aa～52 aa,1E3识别的是N端的52 aa～102 aa.这些单抗为鸡IL-10的检测及生物学功能研究奠定了基础.