脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞中炎性因子和核转录子-κB的表达

摘要

试验预探索脂多糖(LPS)刺激奶牛乳腺上皮细胞炎性因子产生时间、浓度以及其对NF-κB信号通路的激活情况.用酶消化法培养奶牛乳腺上皮细胞(bMEC);CCK-8法筛选LPS最佳刺激浓度(IR≤10％),并用其处理对数期生长的bMEC.ELISA试剂盒检测0～24 h不同处理时间细胞培养液上清中TNF-α和IL-1β表达变化,以确定炎症模型是否建立成功;用Western-Blot检测核转录因子NF-κB(p-p65和p65)及其抑制蛋白(p-IκBα和IκBα)的表达.结果显示,用酶消化法成功培养原代bMEC;CCK-8法筛选LPS的最佳致炎浓度为1μg/mL;LPS处理后3～24 h可极显著增加奶牛乳腺上皮细胞中TNF-α和IL-1 β表达,并在处理后15 min极显著提高bMEC中p-p65和p-IκBα的表达.上述结果说明,LPS能够在3～24 h内有效诱导bMEC炎症模型的建立,并能在15 min时活化奶牛乳腺上皮细胞中的NF-κB信号通路.