A型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXMCPA02表达条件的优化

摘要

采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含α毒素突变基因的重组质粒,同时用SDS-PAGE检测不同条件下α 毒素突变基因的表达情况.经酶切鉴定证实重组质粒pXMCPA02含有α毒素突变基因且基因序列和阅读框架正确.同时以IPTG为诱导剂诱导α 毒素突变基因表达并对其表达条件进行优化.优化表达的结果是:培养基pH7.5,培养温度37 ℃,IPTG浓度0.8 mmol/L,菌体生长密度OD600达到0.8时加入IPTG,诱导时间5 h,此时重组菌株pXMCPA02蛋白表达量为35%.从而实现了α 毒素突变基因的高效表达,为A型产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌苗的生产工艺研究提供了可靠的试验数据.