ADV分离强毒株全基因突变重组质粒的构建、表达及其免疫原性的分析

摘要

为研制水貂阿留申病核酸疫苗,应用重叠延伸PCR技术去除ADV VP2基因中编码428～ 446位氨基酸的核苷酸序列,与pcDNA3.1(+)载体连接,构建全基因突变重组质粒pcDNA3.1-ADV-428,在此基础上,截去编码487 ～ 501位氨基酸的核苷酸序列,构建全基因突变重组质粒pcDNA3.1-ADV-428-487.将构建的重组质粒经肌肉注射免疫小鼠,应用间接ELISA法检测接种后14、28、42、56 d抗ADV抗体水平;流式细胞术检测接种后第42天小鼠脾细胞CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群.结果显示,小鼠接种质粒后CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群数量均明显增加,第42天抗ADV抗体水平达峰值.本试验通过对ADV全基因突变重组质粒的免疫原性进行分析,为水貂阿留申病核酸疫苗的研制提供了参考.