环氧合酶-2反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用

摘要

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用。方法采用脂质体介导方法,分别构建转染COX-2反义真核表达载体和空载体的膀胱癌细胞系5637-AS细胞和5637-P细胞,RT-PCR及W estern b lot分析转染细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平。MTT比色实验、Boyden侵袭小室法和裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞体外增殖速度、体外侵袭力和体内成瘤性。结果RT-PCR结果显示,5637-AS细胞COX-2/磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）mRNA比值（0.65）明显低于5637（0.92）和5637-P细胞（0.90）;W estern b lot提示5637-AS细胞COX-2/β-actin比值（0.29）明显低于5637细胞（0.46）和5637-P细胞（0.44）。MTT比色实验显示5637-AS细胞较5637-P、5637细胞生长速度减慢,三者倍增时间分别为3.6 d、2.9 d和2.9 d。体外侵袭实验结果表明,5637-AS侵袭细胞数显著低于5637细胞及5637-P细胞（18.20±5.97比45.40±8.12,18.20±5.97比44.10±6.47,P＜0.01）。裸鼠成瘤实验中,5637-P、5637细胞接种裸鼠后第5天肿瘤长出,而5637-AS细胞第7天肿瘤长出;30 d后5637-AS细胞接种组瘤体重量（392.15 mg±33.58 mg）明显小于5637细胞（738.26 mg±66.32 mg）,和5637-P细胞接种组（698.53 mg±88.76 mg）,P＜0.01。结论膀胱癌细胞中COX-2过表达与细胞的恶性表型相关,反义技术抑制COX-2表达可以逆转膀胱癌细胞的恶性表型。