前列腺癌噬菌体抗体库的构建及抗特异性膜抗原抗体的筛选

摘要

目的建立国人前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库,筛选、鉴定抗前列腺特异性膜抗原（PSMA）的人源Fab抗体可变区的编码基因,为前列腺癌的诊断与基因治疗研究开辟新途径。方法20例前列腺癌患者外周血分离淋巴细胞,提取其总RNA,经RT-PCR及半套式扩增得到免疫球蛋白全部轻链和重链Fd段基因,克隆进载体pComb3,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库。采用噬菌体表面展示技术,以PSMA原核表达重组子pET30a（+）-PSMA诱导表达并纯化后的PSMA为固相抗原,从噬菌体Fab抗体库中经过"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,获得抗原结合活性和特异性较强的PSMA人源Fab可变区抗体基因片段的阳性克隆,并进行免疫检测及序列测定。结果成功构建前列腺癌噬菌体抗体Fab片段库,其轻链及重链Fd段与载体DNA的重组率分别为87%、79%,库容为2.32×10~7,滴度为8.7×1013pfu/ml。筛选得到Fab抗体克隆的Fd段基因核苷酸序列为696 bp,编码由232个氨基酸残基组成的多肽,与人免疫球蛋白γ链恒定区的同源性为98%;轻链κ基因核苷酸序列为630bp,编码由210个氨基酸残基组成的多肽,与κ链恒定区同源性为93%。结论成功构建了前列腺癌噬菌体抗体库,并获得了PSMA人Fab抗体可变区编码基因克隆,该克隆抗体基因具有典型的免疫球蛋白轻链和重链可变区的结构特点,基因编码产物具有与PSMA反应的免疫学活性和特异性。