结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变微通道电泳检测方法的建立

摘要

目的建立一种用微通道电泳芯片分析系统检测结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变的方法.方法以丙烯酰胺及其衍生物的聚合物溶液作为筛分介质,溶液中掺入微量的吖啶橙作为荧光标记物,对结核分支杆菌的异烟肼耐药相关的katG和inhA基因进行单链构象多态性(SSCP)分析,检测其与耐药性相关的突变.对于突变部位附近没有二级结构的inhA基因,设计了特别的引物使扩增产物增加一个能与突变部位配对的区域,从而使野生型片段呈现独特的构象. 结果此方法可实现对katG基因野生型片段与315位密码子突变型片段的区分,以及对inhA基因调节序列野生型与突变型片段的区分.30个临床分离株中的23个耐药株有22个被检出,效率达95%. 结论微通道电泳方法用于结核杆菌耐药基因突变检测,具有快速、灵敏的优点,可望将之应用于临床耐药性检测.