Ag85B与MPT64 DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

摘要

目的研究Ag85B与MPT64 DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的免疫保护效果.方法 C57BL/6小鼠54只,采用随机数字表法随机分为6组, 分别用磷酸盐缓冲液(PBS)、pcDNA3.1(+)、卡介苗(BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT64、pcDNA/Ag85B+pcDNA/MPT64经肌肉注射法免疫小鼠,0、3、6周各1次,即PBS 组、pcDNA3.1组、BCG 组、pcDNA/Ag85B组、pcDNA/MPT64组及pcDNA/Ag85B+pcDNA/MPT64组. BCG组只在0周予皮内注射卡介苗1次.末次免疫后第5周用1×106CFU的H37Rv 经尾静脉实施攻击,攻击后6周处死部分小鼠,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清总IgG、纯化蛋白衍生物(PPD)特异性脾淋巴细胞干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)分泌水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定特异性脾淋巴细胞增殖;作脾、肺组织荷菌量和病理学检查,并观察小鼠存活时间.结果 PBS组肺和脾器官荷菌量分别为lg-1(7.854±0.003)CFU/g和lg-1(7.190±0.016)CFU/g、pcDNA3.1组分别为lg-1(7.700±0.016)CFU/g和lg-1(7.072±0.068)CFU/g、BCG组分别为lg-1(6.449±0.002 )CFU/g和lg-1(5 .436±0.042)CFU/g、pcDNA/Ag85B组分别为lg-1(7.370±0.002 )CFU/g和lg-1(6.429 6±0.009)CFU/g、pcDNA/MPT64组分别为lg-1(7.547±0.003)CFU/g和lg-1(6.784±0.002)CFU/g、pcDNA/Ag85B+pcDNA/MPT64组分别为lg-1(6.918±0.002)CFU/g和lg-1(6.079±0.004)CFU/g,Ag85B与MPT64 DNA疫苗联合免疫组与DNA疫苗单独免疫组比较,差异有显著性(P<0.05),但不及BCG组(P<0.01);免疫小鼠诱导的特异性IgG、脾淋巴细胞增殖和IFN-γ的分泌以及肺、脾病理学改变和小鼠存活时间Ag85B与MPT64 DNA疫苗联合免疫组也明显优于其他DNA疫苗单独免疫组.结论 Ag85B与MPT64 DNA联合免疫在抗结核分枝杆菌感染过程中具有明显的免疫保护作用,但没有达到BCG的免疫保护水平.