肺泡微石症患者磷酸钠协同转运蛋白基因的检测及其变异

摘要

目的检测3例肺泡微石症患者的磷酸钠协同转运蛋白基因（SLC34A2）基因变异情况,探讨该基因对人肺泡上皮细胞A549系（简称A549细胞）中钙、磷转运的影响.方法采用分段PCR和基因测序的方法对3例肺泡微石症患者的SLC34A2基因进行检测,用Trizol法从新鲜肺组织中获得RNA,逆转录-PCR调取目的基因,构建该基因真核表达载体,质脂体方法转染A549细胞,逆转录-PCR检测SLC34A2 mRNA的表达,检测细胞上清液中钙、磷含量.细胞实验分为转染组（5×105/孔,4孔）、对照组（5×105/孔,1孔）和空白组（5×105/孔,1孔）,实验重复6次.计量资料采用单因素方差分析,多组问两两比较采用SNK-q检验.结果 3例肺泡微石症患者中未发现变异的外显子.获得完整的SLC34A2 cDNA,成功构建peDNA3.1（+）-SLC34A2真核表达载体,并转染A549细胞.转染组SLC34A2 mRNA的吸光度值（2.48.±0.45）明显高于对照组（0.55±0.07）和空白组（0.60±0.06）,差异均有统计学意义（q值分别为16.25和15.78,均P＜0.01）;转染组细胞上清液中钙、磷含量[（0.110±0.016）mmol/L和（3.8±0.4）mmol/L]明显低于对照组[（0.254±0.047）mmol/L和（7.3±0.8）mmol/L]和空白组[（0.262±0.041）mmoL/L和（7.1±0.4）mmol/L],差异均有统计学意义（q值为8.657～13.892,均P＜0.01）.结论随着SLC34A2基因的表达量增加,细胞外液钙、磷含量随之下降.SLC34A2的变异可能未发生在基因组水平。